科研服务

Research Service

GST pull down

GST pull down技术原理
先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上,再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育,这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,即GST pull down产物。这种互作复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白,也可以用质谱鉴定出未知蛋白。


GST pull down实验流程
gst pulldown测定_GST-pull down质谱分析_GST标签蛋白.jpg

GST pull down技术应用

筛选或验证和靶蛋白的互作蛋白。



几种蛋白互作实验的特点

1. GST pull-down:体外表达诱饵蛋白,适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况;

2. AP-MS:体内表达带标签的诱饵蛋白,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;

3. TAP-MS:体内表达带双标签的诱饵蛋白,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;

4. CoIP:原汁原味的体内蛋白复合物分离,适合于有非常好的IP级别抗体的情况;

5. SILAC-IP:可定量鉴定分析体内蛋白复合物,适合于可传代细胞,尤其是易转基因细胞。


GST pull down技术
服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验,众多服务案例,服务成果得到优秀期刊认可;
2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户情况提出合适的方案建议;
3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;
4. 自有蛋白质组学平台,对微量互作蛋白的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解;
5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。


GST pull down服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 


GST pulldown WB

实验样本
诱饵蛋白的GST原核表达载体
待测蛋白抗体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、待测蛋白WB检测图
3、结果整理图
4、实验报告

 


3-4周

GST pulldown MS实验样本
诱饵蛋白的GST原核表达载体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、质谱检测结果
3、生物信息学分析结果
4、实验报告

6-7周


GST pull down 客户文献

1. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research.  2019,IF=9.727.
【研究内容】:前期研究表明,GYS2基因在HCC患者低表达,干扰GYS2基因表达导致肿瘤增殖转移。本研究通过融合表达GST-GYS2、His-p53、His-MDM2,并用GST-pull down方法,证实了MDM2与p53竞争性结合GYS2基因。相关的COIPChIP-qPCR等实验进一步阐明GYS2基因降低肿瘤增殖转移的机制。
使用相关技术: gst pulldown测定、GST-pull down质谱分析、GST标签蛋白


2. Jiang L. et al: Bach1 Represses Wnt/β-Catenin Signaling and Angiogenesis. Circ Res. 2015,IF=14.467.
【研究内容】:Wnt/β-catenin信号在内皮细胞的血管生成活性中起重要作用。过表达实验表明,转录因子Bach1过表达可抑制后肢缺血小鼠的血管生成,并抑制Wnt3a刺激的血管生成反应和人脐静脉内皮细胞Wnt/β-catenin靶基因的表达。Co-IP实验和gst pull-down分析表明,Bach1直接与TCF4结合,并减少β-catenin与TCF4的相互作用。研究揭示了Bach1抑制外周缺血损伤后的血管生成的作用机制,为血管生成治疗或其他涉及Wnt/β-catenin通路异常调节的疾病提供了新的治疗靶点。
使用相关技术: GST 融合蛋白、GST pull-down实验、GST pull-down技术


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