科研服务

Research Service

免疫共沉淀CoIP

免疫共沉淀CoIP技术原理

细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体结合到Beads上,同时诱饵蛋白的互作蛋白,也一起“共沉淀”到Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到免疫共沉淀CoIP产物。CoIP产物既可用Western Blot检测已知蛋白,也可用质谱鉴定未知蛋白。

当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了Flag标签的诱饵蛋白,利用Flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,其互作蛋白“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后用WB或质谱检测。


免疫共沉淀CoIP实验流程
CoIP实验服务_免疫共沉淀coip检测_Co-IP实验代做.jpg
带标签免疫共沉淀CoIP实验流程:

质谱鉴定_coip免疫共沉淀_Co-IP MS技术实验.jpg

免疫共沉淀CoIP技术应用

筛选或验证内源性的互作蛋白。

 

几种蛋白互作技术特点

1. GST pull down:体外表达诱饵蛋白,简单易行,适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况;
2. AP-MS:体内表达带标签的诱饵蛋白,洗脱产物无抗体污染,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;
3. TAP-MS:体内表达带双标签的诱饵蛋白,两次纯化,非特异结合蛋白更少,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;
4. CoIP:基本是天然蛋白复合物分离,能比较好的反应体内真实的蛋白互作情况,适合于有非常好的IP级别抗体的情况;
5. SILAC-IP:可定量鉴定分析体内蛋白复合物,适合于可传代细胞,尤其是易转基因细胞。



免疫共沉淀CoIP服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验,服务客户众多,案例发表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上;
2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议;
3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;
4. 自有蛋白质组学平台,对微量CoIP实验产物的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解;
5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心免疫共沉淀下游实验及投稿。

免疫共沉淀CoIP
服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 


Co-IP

实验样本
诱饵蛋白的IP级抗体
待测蛋白抗体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、待测蛋白WB检测图
3、结果整理图
4、实验报告

 


3-4周

Co-IP MS实验样本
诱饵蛋白的IP级抗体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、质谱检测结果
3、生物信息学分析结果
4、实验报告

6-7周


免疫共沉淀CoIP 客户文献

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019,IF=13.256.
【研究内容】:客户发现,作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因,受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合,免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明,FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力,参与了脱落酸信号通路。
使用相关技术:质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS实验


2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019,IF= 9.727.
【研究内容】:客户利用蛋白质组学技术,筛选出胆固醇致前列腺癌发生上皮间质转变(EMT)的重要基因APMAP和EGFR。通过在前列腺癌细胞表达3*Flag-APMAP基因,并利用免疫共沉淀CoIP及质谱鉴定技术,客户发现EPS15R可与APMAP结合。进一步的研究证实,体内EPS15R-APMAP复合物通过EGFR致使细胞发生EMT。
使用相关技术:蛋白质组学、质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP


3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=10.717.
【研究内容】:前期研究表明UBAP2L蛋白参与应激颗粒形成。客户在这项研究中,用免疫共沉淀结合质谱等技术,发现PRMT1甲基化UBAP2L,UBAP2L蛋白并且和另外三个应激颗粒形成有关的重要蛋白有相互作用。这些蛋白复合物介导了应激颗粒的形成。
使用相关技术:CoIP技术服务、质谱鉴定、修饰位点鉴定



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