科研服务

Research Service

亲和纯化AP-MS

亲和纯化质谱 AP-MS技术原理
细胞表达融合了Strep等标签的诱饵蛋白,经裂解后与Streptactin珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,诱饵融合蛋白的互作蛋白也“共沉淀”到Beads上,洗涤掉非特异结合蛋白后,再将蛋白复合物洗脱下来。已知互作蛋白可以WB检测,未知互作蛋白可以质谱鉴定。


亲和纯化质谱 AP-MS实验流程

亲和纯化质谱技术服务_AP-MS实验外包.jpg
亲和纯化质谱 AP-MS技术应用

筛选或验证和诱饵蛋白的互作蛋白

 

几种蛋白互作技术特点

1.  GST pull down:体外表达诱饵蛋白,简单易行,适合无IP级别抗体、又不易转基因的情况;

2.  AP-MS:体内表达带标签的诱饵蛋白,洗脱产物无抗体污染,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;

3.  TAP-MS:体内表达带双标签的诱饵蛋白,两次纯化,非特异结合蛋白更少,适合无IP级别抗体、但易转基因的情况;

4.  CoIP:基本是天然蛋白复合物分离,能比较好的反应体内真实的蛋白互作情况,适合于有非常好的IP级别抗体的情况;

5.  SILAC-IP:可定量鉴定分析体内蛋白复合物,适合于可传代细胞,尤其是易转基因细胞。


亲和纯化质谱AP-MS服务*辉骏优势

1. 近十年服务经验,服务客户多,案例发表在Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上;

2. 对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议;

3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;

4. 自有蛋白质组学平台,对亲和纯化产物的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解;

5. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心亲和纯化质谱下游实验及投稿。


AP MS服务信息

项目名称

客户提供

结果交付

实验周期

 


AP MS

细胞样本
诱饵蛋白的IP级抗体
实验信息表

1、诱饵蛋白WB检测图
2、质谱检测结果
3、生物信息学分析结果
4、实验报告

 


6-7周


亲和纯化质谱 AP-MS 客户文章

1. Chen F.Y. et al: Protein target identification of ginsenosides in skeletal muscle tissues:discovery of natural small-molecule activators of muscle-type creatine kinase. J Ginseng Res. 2020, IF=5.487.
【研究内容】:人参皂苷作为人参的主要成分,能缓解肌肉疲劳。但人参皂苷缓解肌肉疲劳的机理并不太清楚,客户将人参皂苷固定在Beads上,利用亲和纯化质谱(AP-MS)技术,从肌肉组织分离和鉴定出人参皂苷的结合蛋白CK-MM。而后,作者用人参皂苷的不同代谢物及CK-MM的不同突变体做结合力测试,确立了最有效的代谢产物及其和CK-MM的作用位点。
使用技术:亲和纯化质谱、AP MS技术服务


2. Zhang M.et al: Progesterone receptor membrane component1 is a functional part of the Glucagon-like Peptide-1 (GLP-1) receptor complex in pancreaticβcells.Molecular & Cellular Proteomics.  2014,IF=4.87.

【研究内容】:目前,胰高血糖素样肽-1 受体(GLP-1R)激动剂是2型糖尿病的重要治疗选择。为了更好地理解控制GLP-1促胰岛素作用的机制,作者通过亲和纯化质谱(AP-MS)技术分离鉴定与GLP-1R互作的潜在蛋白。结合Co-IP等实验,进一步验证了三种新的GLP-1R互作因子(PGRMC1、Rab5b和Rab5c);其中,PGRMC1表达于β细胞表面与活化的GLP-1R相互作用,以增强GLP-1的促胰岛素作用。
使用技术:亲和纯化标签、AP-MS亲和纯化质谱


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