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iTRAQ标记定量蛋白质组学

一、iTRAQ概述
        iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation,iTRAQ)是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用同位素试剂可同时标记8个多肽样品,标记的多肽样品等量混匀后,经液相色谱分离及串联质谱(MS/MS)分析,可得到各肽段的一、二级质谱信息。一级质谱中,不同样品来源的同一肽段表现出相同的质荷比;二级质谱中,肽段碎片离子的质荷比及8种iTRAQ报告离子的信号强度,包含了肽段的序列信息及该肽段在不同样品中的相对表达量信息,通过生物信息学分析即可鉴定出所测蛋白及其在各样品中的表达差异。
       
       iTRAQ技术在微生物抗协迫机制和动植物发育分化机理研究及医学生物标记物筛选领域都有广泛应用。

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二、技术原理
        iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和肽反应基团。

        报告基团有8种分子量,范围从113到121(无120);平衡基团也8有种不同的分子量,与不同的报告基团搭配,能保证被标记的不同来源的同一肽段在一级质谱中具有相同的质荷比;肽反应基团能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接使肽段连上标记。

 

        一级质谱中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样品中的同一肽段表现出相同的质荷比;二级质谱中,化学键断裂释放出iTRAQ报告离子,在质谱低质量区产生了8个报告离子峰,其强度反应了该肽段在不同样品中的相对表达量信息,另外二级质谱中的肽段碎片离子峰质荷比反应了该肽段的序列信息;这些质谱原始数据经过数据库检索,可得到蛋白质的定性和相对定量信息。

三、技术优势
1.灵敏度高:低丰度蛋白也能检测出;
2. 适用范围广:几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定;
3. 高通量:能同时对10组样本中包含的蛋白进行鉴定及表达差异分析;
4. 高效:液相色谱与串联质谱连用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。

四、iTRAQ技术服务流程


五、服务信息
项目名称 客户提供 结果交付 实验周期
iTRAQ 1. 原始样本(干冰或液氮保存寄送,广州地区可上门取样);
2. 样本信息;
3. 分析要求
1. 质谱原始数据
2. 质谱检索excel表
3. 筛选的差异蛋白excel表
4. 生物信息学分析结果
5. 完整实验报告
5-7周


六、方案咨询与送样须知
1、方案咨询:我司将根据您的研究目为您设计合理的iTRAQ实验方案,具体请联系我司。
2、送样须知:样本应避免污染和反复冻融,需用液氮或干冰保存寄送;广州的客户可上门收样。
注:iTRAQ试剂可以标记任何类型的蛋白样本,如组织、细胞、细菌等材料。因此我司接受多种类型的样本,但对于不同类型的样本需要量有所不同,具体请咨询我司。


七、iTRAQ实验服务报告内容
  1、蛋白定鉴定和定量分析结果; 
  2、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图; 
  3、实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。

 

八、iTRAQ实验服务案例

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