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Western blot实验技术服务

Western Blot概述


Western Blot采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离蛋白质混合物,经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物(NC膜,PVDF膜等)上后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与其对应的抗体发生免疫反应,一抗再与酶标记的二抗体起反应,经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。

   
由于Western blot技术服务具有简便,快捷等特点,所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的检测。

 


技术服务内容


辉骏生物:Western blot实验服务内容

 


送样须知


为了保证Western blot技术服务能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:

顾客提供:组织、细胞、蛋白质溶液等;一抗(如果公司抗体库里没有)。

运输要求:干冰或液氮包装寄送,广州本地客户可上门收样。
   
注:样本应避免各类污染和反复冻融。

 


实验服务报告内容


1、Western blot蛋白质浓度及电泳上样量;

  
2、原始胶片、电子图片及图片分析结果;  
  

3、Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。

 

实验案例


 
Western blot,Immunoblotting,免疫印迹,蛋白质组学实验服务
 
 

 


实验服务周期及收费标准


咨询本公司QQ/电话:400 699 1663

 


服务承诺


利用内参精确定量,并提供清晰、客观的western结果。




附:Western blot实验步骤


1、Western blot蛋白质提取:根据实验目的的不同选择不同的裂解液,如RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液,同时根据蛋白质提取组分的不同选择不同的方法,如提取核蛋白,细胞质蛋白,膜蛋白等。


2、蛋白定量,根据蛋白质的提取条件不同,可采取不同的定量方法,如bradford法、BCA法等。
 

3、电泳,依据需要检测蛋白的分子量选取分离胶的浓度,分别配置分离胶和积成胶,凝胶凝固后进行蛋白质上样和电泳。
 

4、转膜,可采取半干法和湿法转移,当采取半干法转膜时需防止短路:从下到上的顺序:滤纸/PVDF膜/凝胶/滤纸/阴极(bio-rad转膜仪)。
 

5、封闭:5%脱脂奶粉或5% BSA封闭过夜或室温1小时,孵育时间可根据实验需要进行改变。
 

6、一抗孵育,5%脱脂奶粉稀释一抗到合适的浓度,与膜室温孵育1小时或4度过夜,孵育时间可参考抗体说明书,并加以优化,一抗孵育后TBST洗膜3次,每次5分钟。


7、二抗孵育,5%脱脂奶粉稀释二抗到合适的浓度,与膜室温孵育1小时,TBST洗膜3次,每次5分钟。
 

8、显影(ECL法):将A、B两种底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,置于压片盒中,迅速盖上胶片,关闭胶盒进行曝光,曝光一定时间后取出胶片,浸入显影液中显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水冲净晾干,标定Marker,扫描胶片和Western blot 图片分析。
 

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