服务项目 / Our professional service 辉骏首页>服务项目>核酸蛋白服务>

DNA pull down

技术概述
DNA pull down-MS是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如具体某个或某些转录因子/组蛋白等)。

 
技术原理


生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用,可以纯化出各种生物大分子复合物。
       
DNA pull down实验首先针对靶标区域设计DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,洗脱得到DNA片段的结合蛋白质。
 


技术应用


目的DNA片段的互作蛋白(如转录因子等)筛选。
 

技术流程      


辉骏生物:DNA pull down技术流程

 
服务信息


项目名称 客户提供 结果交付
DNA pull down
 
1. 基因信息(物种、序列)
2. 细胞系及培养信息
3. 待验证的蛋白信息
4. 蛋白抗体
1. 原始结果图(包括Input、阳性及阴性对照结果)
2. 完整实验报告(包括实验材料、方法、结果分析)
DNA pull down MS
 
1. 基因信息(物种、序列或ID)
2. 细胞系及培养信息

 
1. 原始结果图(input和洗脱液的SDS-PAGE图)
2. 质谱检索结果
3. 完整实验报告(包括实验材料、方法、结果分析)



参考文献
1.A requirement for breast-cancer-associated gene 1 (BRCA1) in the spindle checkpoint. Proc Natl AcadSci U S A 101(49):17108-17113(2004).
       
2.Identification of DNA-binding proteins that interact with the 5'-flanking region of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. J Pharm Biomed Anal 116:94-100(2015).



> BACK TO HOME
  • 广州辉骏生物科技有限公司
    地址:广州市萝岗区科学城科技企业孵化园区
    7x24小时客服电话:020-32053431
    企业QQ:
    ©2011-2015 广州辉骏生物科技有限公司 版权所有 粤ICP备09009201号