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HCV感染通过抑制lncRNA Linc-Pint来促进脂肪生成

发布时间:2020/11/20 15:03:28 作者:辉骏生物

标题:Inhibition of long noncoding RNA Linc-Pint by hepatitis C virus in infected hepatocytes enhances lipogenesis.

期刊:Hepatology

影响因子:14.971

关键词:HCV,lncRNA,Linc-Pint,PRC2,SRPK2,FASN,脂肪生成

主要技术方法:RNA pull down,质谱鉴定(LC-MS/MS),RNA免疫共沉淀(RIP)等

 丙型肝炎病毒(HCV)经是引起丙型肝炎的病原体,属于RNA病毒。HCV编码的几个因子可以损害宿主基因,实现慢性感染,通常导致肝硬化或肝细胞癌(HCC)。长链非编码RNA(LncRNA)在生物调节中显示出不同的作用,而其在HCV病毒复制和相关疾病中的作用还知之甚少。

2020年11月,美国圣路易斯大学病理系的Mousumi Khatun等人发现在HCV感染的肝细胞和肝脏样本中,Linc-Pint显著下调。从机制上讲,Linc-Pint可以结合并下调丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶2 (SRPK2)的蛋白水平,进而抑制脂肪生成相关基因(FASN和ACLY)的表达。HCV介导的Linc-Pint下调增强了脂肪生成,有利于病毒复制和肝病的发展。

HCV感染通过抑制lncRNA Linc-Pint来促进脂肪生成.png
1.    Linc-Pint在HCV感染的肝细胞中下调且促进细胞增殖
qRT-PCR检测发现,Linc-Pint在HCV感染的肝细胞或是慢性HCV感染的人肝活检标本中含量较低。当在肝细胞中过表达Linc-Pint后,细胞增殖受到显著抑制。

2.    Linc-Pint结合SPRK2蛋白并下调其表达
据报道,Linc-Pint由p53转录诱导,通过与PRC2相互作用,抑制癌细胞的迁移和侵袭。研究者利用RNA pull-down和质谱检测(LC-MS/MS)技术,发现在许多肿瘤中高表达且对肿瘤进展和转移有重要作用的SRPK2可能是Linc-Pint的潜在结合蛋白,并利用RNA pull down WB和RNA免疫共沉淀(RIP-qPCR)技术验证了两者之间的相互作用。RNA pull-down实验结果进一步确定了Linc-Pint与SRPK2的结合位点位于其635-904nt之间。

接下来,作者研究了Linc-Pint对SPRK2的影响。当在细胞中过表达Linc-Pint时, SPRK2蛋白水平下调,而RNA水平没有变化,因此接着探讨了Linc-Pint是否影响SPRK2蛋白的稳定性。Linc-Pint过表达的细胞中使用MG132蛋白酶体抑制剂处理后,Linc-Pint对SPRK2蛋白的抑制减弱了,表明Linc-Pint可能通过蛋白酶体的降解在蛋白水平下调SRPK2的表达。

3.    Linc-Pint通过下调SRPK2来抑制脂肪合成途径
据报道,SRPK2通过磷酸化SR蛋白(富含丝氨酸/精氨酸的蛋白),诱导脂肪合成途径的不同基因如脂肪酸合成酶(FASN)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)的有效剪接,导致这些基因在mRNA和蛋白水平的表达增加。qRT-PCR结果显示,Linc-Pint过表达显著下调了肝细胞中FASN和ACLY的mRNA水平。荧光显微镜观察进一步显示,Linc-Pint通过抑制SRPK2抑制脂肪合成基因的表达。干扰SRPK2基因后,肝细胞中FASN和ACLY mRNA的表达显著下调,表明SRPK2参与了肝细胞脂肪合成途径的调控。

4.    Linc-Pint在HCV感染的肝细胞中的作用
已有报道指出HCV感染诱导了肝细胞中的脂肪从头合成途径,因此我们猜测Linc-Pint是否通过抑制肝细胞脂肪合成途径来抑制HCV复制。结果发现,HCV感染后促进了SRPK2和FASN的表达,而当同时过表达Linc-Pint时,SRPK2和FASN的表达被显著抑制。进一步的实验表明,Linc-Pint的过表达抑制了SRPK2激酶的活性。那么Linc-Pint过表达是否影响HCV的复制呢?qPCR结果表明Linc-Pint过表达抑制了HCV的复制;干扰SRPK2后,HCV的复制受到抑制。

本研究有助于从机制上理解Linc-Pint在HCV相关的肝脏发病机制中的作用。

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