技术资料 / Technical materials 辉骏首页>文献解读>

iTRAQ实验技术分析软骨形成过程中蛋白质组的变化

摘要:多能间质干细胞的软骨形成潜能使其有望成为细胞治疗软骨缺陷的原料。然而,确切的细胞内软骨形成以及MSCs自我更新的分子机制仍不清楚。为了了解更多的根本机制,作者采用iTRAQ实验技术结合联机双向LC/MS/MS实验技术检测了软骨形成体外模型中差异蛋白的表达。一共鉴定了1756种蛋白。线性回归分析两次双向LC/MS/MS以及三次独立iTRAQ的定量数据有很高的关联度。在这1756种定量蛋白中,有100种是显著变化的,其中的6种通过Western 实验技术进一步验证。功能分类实验表明17中种上调的蛋白主要包含成熟软骨细胞的标志和参与软骨细胞外基质合成的酶,而83中下调的蛋白主要与能量代谢、染色质重组、转录、mRNA加工、信号转导和细胞骨架;除了许多已知的蛋白,大多数变化的蛋白对于软骨形成是新颖的。最后,在本文中鉴定的,两种新的与软骨形成相关的蛋白的生物学作用被证实。这些数据为更好的理解调节这种复杂生物学进程的潜在机制提供了线索,并且有助于MSCs在细胞治疗软骨再生中的应用。


实验技术:本文首先应用western实验技术、组化学实验技术和流式细胞实验技术分析了体外模型中软骨形成的分化过程,然后通过iTRAQ定量蛋白组学实验技术检测了软骨体外模型中相关蛋白的表达差异,结合双向LC/MS/MS实验技术鉴定了相关的蛋白,筛查到的蛋白通过功能分类实验归类、又通过western blot实验技术、Real time PCR实验技术对其中某些蛋白进一步的验证,最终证实了两种新的与软骨形成相关蛋白的生物学作用。


意义:由iTRAQ定量蛋白组学实验技术和双向LC/MS/MS实验技术筛查到的数据为更好的理解调节这种复杂生物学进程的潜在机制提供了线索,并且有助于MSCs在细胞治疗软骨再生中的应用。


文献来源:Molecular & Cellular Proteomics 9: 550–564, 2010.

> BACK TO HOME
  • 广州辉骏生物科技有限公司
    地址:广州市萝岗区科学城科技企业孵化园区
    7x24小时客服电话:020-32053431
    企业QQ:
    ©2011-2015 广州辉骏生物科技有限公司 版权所有 粤ICP备09009201号