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IP / Pull down Beads标签抗体分子互作试剂盒基因表达产品内参抗体分子互作单品
RIP试剂盒
 名称 货号 规格 货期价格
 RIP试剂盒(Protein G 树脂) FI8703 12 / 24 / 40次

 现货



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 RIP试剂盒Protein A/G 磁珠) FI8707 12 / 24 / 40次 现货
 ChainFreeTM Flag-tag RIP试剂盒 FI8704 12 / 24 次 现货
 ChainFreeTM HA-tag RIP试剂盒 FI8708 12 / 24 次 现货
 ChainFreeTM Myc-tag RIP试剂盒 FI8709 12 / 24 次 现货
 ChainFreeTM GFP-tag RIP试剂盒 FI8710 12 / 24 次 现货
 ChainFreeTM mCherry-tag RIP试剂盒 FI8711 12 / 24 次 现货


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RNA免疫共沉淀试剂盒RIP试剂盒)简介


RNA免疫共沉淀(RIP)是采用特异性抗体来调取内源性RNA结合蛋白及其结合RNA的技术。分离出的蛋白可以进行western-blot检测调取效果,而提取纯化的RNA可以利用qPCR(RIP-qPCR)或利用高通量测序(RIP-Seq)方法来检测。


根据诱饵蛋白是否携带标签,以及beads类型不同,辉骏生物公司开发了5款RIP试剂盒,可用于捕获哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等多种生物样本提取物中的目标蛋白及其相互作用蛋白


诱饵蛋白不带标签时,可以根据beads的不同选择protein G 或Protein A/G RIP试剂盒,这两款试剂盒分别采用优化的protein G 或Protein A/G Beads捕获“目标蛋白抗体-目标蛋白-结合RNA”复合体,漂洗去除未结合的RNA后,采用特殊洗脱液将目标蛋白和RNA从Beads上分离出来。


当诱饵蛋白携带标签时,可以根据标签种类的不同选择ChainFreeTM 系列试剂盒,该系列试剂盒采用了优化并重组表达的、无轻重链的标签抗体磁珠进行RIP实验。IP复合物无论采用非变性洗脱还是变性洗脱,均不会出现抗体的轻、重链污染问题。




RIP试剂盒应用


RNA结合蛋白(RBPs)是可以与RNA结合的蛋白质,参与调控了RNA的众多生物学过程。可以说,没有RBPs,RNA几乎寸步难行。RIP技术主要应用于验证或寻找与已知RBP结合的RNA。以下列举了可应用RIP试剂盒的几个研究方向:

1. RBPs功能研究,如活性调控、定位等;

2. RBPs调控的RNA功能研究,如合成、可变剪切、修饰、转运、定位、稳定性和翻译等。





Protein G和ProteinA/G RIP试剂盒-辉骏生物产品优势


1、特殊优化的beads与抗体亲和效率高,抗体用量少;

2、优化的裂解液体系适用于各类样本(动物细胞/组织、植物、微生物);

3、操作简便,周期短,适合初学者。

4、品质好,实验结果稳定。

5、洗脱液适配后续qPCR和高通量测序实验。
RIP试剂盒(rna免疫共沉淀试剂盒)-辉骏生物-价格低大量现货.png





 ChainFreeTM系列RIP试剂盒-辉骏生物产品优势


1. 无抗体轻重链污染:IP复合物无论采用非变性洗脱还是变性洗脱,均不会出现抗体的轻、重链污染问题。

2. 亲和力强:低nM级别亲和力,轻松应对低拷贝基因,或难转染细胞系

3. 特异性强:抗体磁珠通过了20株以上的空白细胞系检测,不易产生非特异吸附

4. 结合量高:每10 µL抗体磁珠可结合约15 µg重组蛋白。

5. 兼容性好:无论标签在诱饵蛋白的N端或C端,都可以识别。

6. 稳定性好:通过了45℃高温测试。

RIP试剂盒(rna免疫共沉淀试剂盒)-辉骏生物-价格低大量现货.png


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辉骏生物ChainFreeTM标签抗体磁珠与其他同类产品对比图


Western-Blot结果显示:辉骏生物ChainFreeTM磁珠对诱饵蛋白的亲和力强,IP效果比肩sigma Anti-Flag M2磁珠,且远高于国产同类磁珠。




Protein G或Protein A/G RIP试剂盒组分(12次)


 试剂名称 体积(12 Tests) 保存条件
 Protein G或Protein A/G磁珠 500 μL 4 ℃
 裂解缓冲液 7 mL 4 ℃
 漂洗液 25 mL 4 ℃
 洗脱缓冲液 550 μL 4 ℃
 蛋白酶抑制剂 200 μL -20 ℃
 RNase抑制剂 50 μL -20 ℃




 ChainFreeTM RIP试剂盒组分(12次)


 试剂名称 体积(12 Tests) 保存条件
 ChainFreeTM 标签抗体磁珠 250 μL 4 ℃
 裂解缓冲液 7 mL 4 ℃
 漂洗液 25 mL 4
 洗脱缓冲液 550 μL 4
 蛋白酶抑制剂 200 μL -20 ℃
 RNase抑制剂 50 μL -20 ℃




RIP实验检测试剂盒使用流程简述


1. 裂解样本;

2. 加入抗体Beads,捕获“抗体-RNA结合蛋白-RNA”复合体;

3. 漂洗、洗脱得到“RNA结合蛋白-RNA“复合体;

4. 提取纯化RNA,进行下游qPCR或seq检测。




RIP试剂盒使用案例


1. 实验设计:分别采用RNA结合蛋白A抗体和IgG进行RIP实验,检测蛋白A是否和X基因结合(以GAPDH基因做对照)。

RIP结果jpg.jpg

图一:目标蛋白A的western-blot图


RIP图2.jpg


图二:待测RNA(B基因)的qPCR检测图(阳性结果)




RIP试剂盒-客户文章


1. Bao X.C. et al: Capturing the interactome of newly transcribed RNA.Nature Methods,15(3): 213–220. 2018,IF=28.467.
【研究内容】:辉骏生物为作者单位之一,和作者共同开发了一种捕获鉴定新生RNA结合蛋白的全新方法(RICK)。该方法用EU标记新生RNA,通过点击反应-生物素-链霉亲和素系统结合质谱分析,分离鉴定RNA互作蛋白。其中,METTL1和CDK1是两个RICK独有的RNA结合蛋白。 RIP-qPCR、RIP-Seq、CLIP-Seq等实验进一步证实了它们与非PolyA RNA的结合,这种结合在细胞分化与增殖中发挥了重要作用。
使用相关技术RIP-qPCR、RNA免疫共沉淀RIP-Seq、RNA结合蛋白免疫沉淀技术


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