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细胞转染的需要注意什么?
转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技
为何蛋白不能成功表达?
做蛋白表达实验的时候,有时候实验会觉得参考实验方法和克隆的蛋白基因序列完全没有问题,蛋白电泳就是没有结果。就个人经验总结和一些网络资源汇总了下蛋白不表达的原因。 1、载体构建错误。这个屡见不鲜,很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体,其克
双酶切和同源重组法构建载体
基因克隆是分子生物学中的一种底子的操作方法。通过双酶切来 构建载体 是其间常用的一种方法,这种方法运用限制性内切酶可以辨认并切开特定的核苷酸的原理,用两种不同的限制性内切酶切开靶基因得到前后都带有粘性结束的靶基因片段,与相同经两种限制性内切酶切开得到
辉骏生物:qPCR疑问解答
Q1:Ct值出现过晚(Ct38) A: 扩增效率低,反应条件不够优化,降低退火温度,增加镁离子浓度。 反应成分降解或加样量不足 PCR产物过长,一般采用80-150bp. Q2:标准曲线线性关系不佳 A: 加样存在误差,是样品浓度不成梯度。 标准品出现降解,避免反复冻融。 引物或者
3种常用基因功能验正方法
科研人员在分析项目的过程中,碰到这样的问题: 通过各种手段(选择清除分析、比较基因组学分析、转录组分析)获得的行驶某种功能的某基因,如果进行实验的验正呢?一般分为: 基因上调(基因转染法)、基因下调(基因干扰法)后看蛋白表达水平、细胞功能改变、在体动
ImageJ新技能:细胞共定位
Imagej 软件作为一款开源免费的图像处理软件不仅可以适用不同电脑操作系统,在图像分析非常强大,辉骏生物给大家介绍一个ImageJ新技能-- 细胞 共定位,教你如何用 image J 进行图像分析! 步骤一 File,Open打开想要分析的两张荧光图片。如下图 步骤二 将两幅图片变成图像
合成多肽与重组蛋白作为抗原的区别
现在抗体制备常选用多肽抗原及重组蛋白质抗原,这两种方法各有优缺点,需结合 实验需求 进行选择。 重组蛋白质抗原上往往带有多个不同的抗原决定簇,其间有些是次第决定簇,有些为结构决定簇。运用变性的抗原免疫动物获得多克隆抗体是针对各个抗原决定簇的抗体的混合物
基因功能分析网站
基因功用注释(GO和KEGG之类的),大多数人最常用的东西是DAVID,但其更新速度一向被吐槽,太慢了~,今天给咱们介绍一个非常好用的网站 Metascape (http://metascape.org/gp/index.html#/main/step1),更新更快,作用更好! Metascape的数据不只更新快,其覆盖面也适当
简介多肽抗原制备多抗的过程
1、多肽组成 依照多肽组成常规操作组成多肽,HPLC检测纯度为95%。多肽C端增加的半胱氨酸残基用于以其巯基衔接于偶联剂上。 2、组成多肽与载体的偶联 载体蛋白选择 BSA/KLH(这儿以BSA为例),用 SPDP衔接法将组成的多肽与 BSA 进行偶联:4.6mg SPDP 溶解于 740ul DMSO
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