CircRNA pull-down试剂盒简介

辉骏生物自主研发的 circRNA pull-down 试剂盒（已获得国家知识产权局发明专利授权），利用“F2标签”与其特异性配体的强亲和力，高效调取细胞中的目标cirRNA及其结合蛋白。F2标签是一段短的RNA序列，与目标circRNA连接后，几乎不影响其结构和功能。

实验前先将F2标签序列与目标circRNA序列连接，构建成F2-circRNA过表达载体，转染并裂解目的细胞，之后采用特异性配体磁珠来调取F2-circRNA及其结合蛋白。去除未结合的蛋白后，可以采用多种方法洗脱蛋白质。分离的蛋白产物既可以用Western blot检测已知蛋白，也可以用质谱（LC-MS/MS）鉴定未知蛋白。

CircRNA Pull down试剂盒应用

蛋白-蛋白间的相互作用是蛋白质发挥生物学功能的主要模式，蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能，形成复杂的信号转导网络。以下列举了可应用pull down试剂盒的几个研究方向或研究领域：

1. 确定2个蛋白是否具有直接相互作用；

2. 确定蛋白之间结合的结构域；

3. 病毒、细菌等病原体侵染宿主细胞的机制；

4. 酶和底物的作用机制；

5. 蛋白调控复合体的研究。

CircRNA pull-down试剂盒组分

试剂名称	体积（12 Tests）	体积（24 Tests）	保存条件
磁珠	500 μL	1 mL	4 ℃
裂解缓冲液	7 mL	14 mL	4 ℃
NT2缓冲液	32 mL	64 mL	4 ℃
RNA结构缓冲液	650 μL	1.3 mL	4 ℃
漂洗液	32 mL	64 mL	4 ℃
洗脱缓冲液	650 μL	1.3 mL	-20 ℃
蛋白酶抑制剂	230 μL	460 μL	-20 ℃
RNase抑制剂	65 μL	130μL	-20 ℃
F2配体	250 μL	500 μL	-20 ℃

CircRNA Pull down试剂盒优势

1、调取效率高：F2标签序列与F2配体磁珠具有很强亲和力，能够高效调取F2-circRNA及其结合蛋白；

2、不受circRNA接口处序列限制，适用于各种序列的circRNA；

3、F2标签很短，只有16nt，几乎不影响目标RNA的结构或功能；

4、洗脱液适配后续Western Blot及质谱（LC-MS/MS）实验。

5、操作简便，耗时短，适用于初学者。

辉骏生物circrna pulldown试剂盒-调取效率高-适用范围广-操作简便.png

CircRNA-pulldown试剂盒使用流程简述

1. 构建F2-circRNA表达载体，转染目标细胞并进行表达检测；

2. 裂解样本，同时制备F2配体磁珠；

3. 将细胞裂解液加入F2配体磁珠中，4 ℃孵育2~4 h；

4. 漂洗、洗脱得到目标蛋白及其互作蛋白复合物。

CircRNA pulldown试剂盒使用案例

circrna pulldown WB辉骏生物.jpg

circrna pulldown WB结果图（阳性）

GST pull down实验服务费用价格实惠质量高-辉骏生物

circrna pull-down MS：质谱检索表格（部分展示）

circrna pull down试剂盒—客户文章

1. A positive feedback between PDIA3P1 and OCT4 promotes the cancer stem cell properties of esophageal squamous cell carcinoma. Cell Communication and Signaling. 2024. IF=8.4