2024年11月12日，复旦大学附属肿瘤医院余科达教授团队在Journal of Clinical Investigation（IF=13.3）发表了题为“MAP3K1 mutations confer tumor immune heterogeneity in hormone receptor-positive HER2-negative breast cancer”的研究论文。

非常荣幸，辉骏生物产品RIP试剂盒（原货号：FI88707，更新后的货号：FI8709)助该研究一臂之力。

HR+/HER2-（激素受体阳性/人表皮生长因子受体2阴性）乳腺癌是最常见乳腺癌类型，其免疫疗法研究尚处早期阶段。研究者发现HR+/HER2-乳腺癌具有高度异质性的肿瘤免疫微环境，且与MAP3K1（有丝分裂原激活蛋白激酶激酶1）突变相关，MAP3K1突变可减弱CD8+ T细胞介导的抗肿瘤免疫。

机制研究表明：MAP3K1突变促进了TAP 1/2(抗原肽转运蛋白1/2) mRNA降解，进而抑制MHC-I介导的肿瘤抗原呈递，驱动肿瘤免疫逃逸。在临床前模型中，酪胺可逆转MAP3K1突变诱导的MHC-I减少，增强免疫治疗疗效。

该研究揭示了驱动HR+/HER2-乳腺癌免疫异质性的重要生物标志物MAP3K1，并阐明了其分子机制，这为利用酪胺增强免疫治疗疗效的新策略提供了依据。

（1）体内和体外实验证实：MAP3K1基因与HR+/HER2-乳腺癌免疫异质性密切相关，MAP3K1突变（MAP3K1-mut）的肿瘤细胞能抑制CD8+ T细胞介导的免疫。

（2）RNA-seq等实验发现MAP3K1-mut肿瘤中的MHC-I抗原呈递通路显著下调，TAP 1和TAP 2是其中的关键基因，过表达Tap 1/2可以有效地挽救肿瘤细胞表面MHC-I表达的下调。

（3）RT-qPCR实验表明MAP3K1-mut在转录后水平抑制Tap 1/2表达，因MEKK1并非RNA结合蛋白（RBP），猜测可能有另外一种分子使Tap 1/2 mRNA不稳定，故通过RNA pull-down与IP实验筛选可结合Tap 1/2 mRNA且与MEKK1互作的RBP。

（4）接下来分析两项检测的蛋白交集，锁定RNA代谢相关的DDX17（DEAD盒解旋酶17）；通过RNA下拉实验表明Tap 1/2 mRNA与DDX17直接结合，且Co-IP结果显示Map3k1-Mut与DDX17结合减少。

研究者使用辉骏生物“RIP试剂盒”进行RIP（RNA免疫沉淀）实验，发现MAP3K1-mut显著增强了DDX17与Tap1/2 mRNA的结合（图1E）。支持“MAP3K1-WT结合DDX17可抑制其降解Tap 1/2 mRNA”的推测。

（5）通过siRNA（siDdx17）挽救实验、免疫荧光等进一步确认：MEKK1突变抑制其与DDX17的结合，促进DDX17介导的Tap1/2 mRNA降解。

（6）鉴于MAP3K1-mut可下调MHC-I重塑免疫微环境、促进肿瘤生长，且酪胺（Tyra）临床转化潜力大，研究者将其应用于体外共培养系统，发现Tyra可逆转MAP3K1-mut肿瘤细胞表面MHC-I及OVA抗原下调，增强CD8+ T细胞活化。

（7）小鼠模型实验显示：单独抗PD-1治疗抑瘤效果有限，而Tyra联合抗PD-1治疗可强效抑制肿瘤生长，且该联合方案能显著提升肿瘤组织CD8+ T细胞浸润与活化。

使用产品：RIP试剂盒（由辉骏生物Fitgene提供产品和技术支持）