Co-IP孵育操作全流程拆解-2分钟搞定免疫共沉淀实验难点-辉骏生物

免疫共沉淀（Co-IP）实验总怕踩坑？尤其是Flag标签抗体磁珠与蛋白样本孵育环节，一步错就可能导致实验失败！辉骏生物用2分钟视频介绍，带你吃透Co-IP孵育全流程，新手也能跟着做、零失误，还附上超实用的实验小tips，快码住～

一、核心实验目标

通过Flag标签抗体磁珠与蛋白样本的特异性孵育，捕获目的蛋白及其相互作用蛋白，实现蛋白复合物的富集与分离，为后续蛋白相互作用验证提供可靠样本。实验核心就是“特异性结合”+“稳定孵育”，新手重点把控这两点就能少走弯路！

二、Co-IP孵育全流程（Flag标签抗体磁珠版）

本流程适配新手操作，步骤精简不繁琐，跟着镜头一步步做即可，全程重点关注操作细节，避免人为误差～

步骤1：实验前准备（缺一不可！）

提前备好所需试剂和仪器：Flag标签抗体磁珠（辉骏货号：FI8201）、蛋白样本（提前提取并验证纯度，避免杂质干扰）、洗涤缓冲液（提前预冷至4℃）、离心管、4℃混匀仪（或摇床）、磁力架。

⚠️ 新手提醒：所有试剂需提前检查保质期，缓冲液避免反复冻融；仪器提前调试好，确保4℃混匀仪正常运行，磁力架无杂质残留。

步骤2：磁珠预处理（关键步骤！重中之重）

1. 取适量Flag标签抗体磁珠（辉骏货号：FI8201）加入离心管，置于磁力架上静置1-2分钟，待磁珠完全吸附后，缓慢吸弃上清液（保存液）；

2. 向离心管中加入预冷的洗涤缓冲液，轻轻颠倒离心管混匀，再次置于磁力架上吸附磁珠，吸弃上清；

3. 重复洗涤2-3次，确保磁珠表面的保存液完全除去，避免影响抗体与目的蛋白的结合效率。

步骤3：蛋白样本与磁珠孵育（核心环节）

1. 向预处理后的磁珠中加入准备好的蛋白样本，轻轻吹打混匀（动作要轻柔，避免蛋白变性）；

2. 将离心管置于4℃混匀仪中，开启低温孵育模式；若没有混匀仪，可用摇床替代，但务必调慢摇床频率（避免磁珠聚集或蛋白降解）；

3. 孵育时间根据目的蛋白表达水平和抗体亲和力调整（具体参考下文tips），期间避免频繁取出离心管，保持温度稳定在4℃。

步骤4：孵育后洗涤（去除非特异性结合）

1. 孵育结束后，将离心管置于磁力架上，静置2-3分钟，待磁珠完全吸附后，小心吸弃上清液（不要吸到磁珠）；

2. 加入预冷的洗涤缓冲液，轻轻混匀后置于磁力架吸附，吸弃上清；重复洗涤3-4次，彻底去除未结合的杂蛋白；

3. 最后一次洗涤后，尽量吸净上清液，保留磁珠-蛋白复合物，用于后续洗脱实验。

步骤5：实验收尾（避免污染）

实验结束后，及时清理仪器和操作台，离心管、枪头等耗材按要求处理；剩余试剂密封后放回对应冰箱保存，做好实验记录（包括孵育时间、仪器参数等），方便后续重复实验。

三、新手必看实验小tips（避坑关键！）

1. 磁珠预处理（关键步骤！）

目的是除去磁珠的保存液，保存液中含有的成分会抑制抗体与目的蛋白的结合，若预处理不彻底，会直接导致孵育效率下降，实验结果无信号！新手务必重复洗涤2-3次，确保上清液完全吸弃。

2. 孵育时间（灵活调整！）

没有固定的孵育时间标准，核心根据目的蛋白的表达水平和抗体亲和力来确定：① 目的蛋白高表达、抗体亲和力强：孵育1-2小时即可；② 目的蛋白低表达、抗体亲和力弱：可延长至4℃过夜孵育（12-16小时），但需注意避免蛋白降解。

3. 4°混匀仪低温孵育（温度+频率双把控！）

低温孵育的目的是维持蛋白活性、减少非特异性结合，必须全程保持4℃稳定；有混匀仪直接用，能保证磁珠与样本充分接触且受力均匀；没有混匀仪用摇床替代时，一定要调慢频率（建议30-50r/min），频率过快会导致磁珠聚集、蛋白变性，影响实验结果。

四、新手避坑总结

1. 全程低温操作：从缓冲液预冷到孵育、洗涤，所有步骤尽量在4℃环境下进行，避免蛋白变性；

2. 动作轻柔：吹打样本、颠倒离心管时，力度要轻，防止蛋白断裂或磁珠破损；

3. 避免污染：所有耗材提前灭菌，操作过程中戴手套、口罩，防止杂蛋白污染样本；

4. 及时记录：每一步的操作时间、试剂用量、仪器参数都要详细记录，方便后续排查问题。

ChainFree^® Flag标签纳米抗体磁珠产品介绍

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ChainFree® Anti-Flag Nanobody Magnetic Beads	FI8201-0.5mL	了解更多
ChainFree® Anti-Flag Nanobody Magnetic Beads	FI8201-1 mL
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ChainFree® Anti-Flag（DYKDDDDK） Nanobody Magnetic Beads产品信息

纳米抗体 (Nanobody) 来源于骆驼科动物体内的重链抗体 (HCAb)，其分子量仅为传统IgG抗体的1/10，可以稳定存在于体外，并且具有完整的抗原识别能力。纳米抗体亲和力强、易于改造和表达，可以通过体外重组表达高质量稳定生产，有效地避免了传统抗体的批次间差异问题。

辉骏生物ChainFree®纳米抗体磁珠-无轻重链污染-高效完成COIP

广州辉骏生物自主研发的ChainFree® Anti-Flag纳米抗体磁珠（Anti-DYKDDDDK 纳米抗体磁珠）偶联了经过严格筛选、优化并重组表达的无轻、重链的Flag纳米抗体，可用于捕获哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等多种生物细胞、组织提取物中的Flag标签（DYKDDDDK）融合蛋白及其相互作用蛋白，且IP洗脱产物中没有抗体轻、重链污染。

磁珠粒径	2 µm
蛋白结合量	≥1.5 mg 蛋白 / mL 磁珠
储存缓冲液	20 mM PBS，5% BSA
反应性	可特异性结合1×或3×Flag标签（DYKDDDDK），对融合蛋白N端、C端或中间的Flag标签均可以识别
保存和运输	4℃保存1年（避免冻存），冰袋运输