稳定细胞株构建技术实验原理

稳转细胞株构建是将外源DNA通过质粒转染或病毒感染的方法导入细胞，实现基因稳定表达或干扰的技术。由于慢病毒可将外源片段稳定整合入宿主细胞基因组，因此特别适合用于稳转细胞株的构建。慢病毒感染比质粒转染更容易操作，并且对各类细胞的转导效率都很高，筛选周期短。

转入外源基因的细胞选用与载体抗性标签对应的药物进行细胞筛选，从而得到可稳定表达/沉默目的基因的细胞株。最常用的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin) 。

稳定细胞株构建技术实验流程

稳转株构建实验流程.jpg

稳定细胞株构建服务信息

辉骏生物提供的稳转细胞株构建服务主要分为以下两种：

稳转细胞株构建服务
服务项目	服务内容	结果交付	实验周期	客户提供
表达稳转株构建	构建基因表达慢病毒载体	载体质粒、甘油菌、测序结果和报告	2-3周	1.细胞及其培养方法 2. 实验信息表（相关基因信息、载体要求等）
	包装基因表达慢病毒	筛选好的表达细胞株、对照细胞株和报告	9-10周
	感染并筛选稳定表达细胞株	筛选好的表达细胞株、对照细胞株和报告
	qPCR检测表达效率	检测结果和报告
shRNA稳转株构建	针对基因序列设计并构建3个shRNA慢病毒载体	载体质粒、甘油菌、测序结果和报告	2-3周	1.细胞及其培养方法 2. 实验信息表（相关基因信息、载体要求等）
	shRNA质粒转染293T细胞进行干扰效率检测	干扰效率检测结果和报告	2周
	干扰效率最高的shRNA质粒包装慢病毒	筛选好的shRNA细胞株、对照细胞株和报告	9-10周
	感染并筛选稳定表达细胞株	筛选好的shRNA细胞株、对照细胞株和报告
	qPCR检测表达效率	检测结果和报告

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**稳转细胞株构建技术服务*辉骏优势**

① 近十年服务经验，众多服务案例，服务成果得到优秀期刊认可

② 自有分子及细胞生物实验平台，能有效制定并执行最优的实验路线

③ 售后技术支持将一直保持到客户发表文章，确保客户安心进行下游实验及投稿

稳定细胞株构建实验结果示例

稳定细胞系荧光检测图

稳定细胞株构建-客户文章

Yang T. et al: CD151 promotes Colorectal Cancer progression by a crosstalk involving CEACAM6, LGR5 and Wnt signaling via TGFβ1. Int J Biol Sci. 2021, IF 6.58.

【研究内容】：研发发现CD151在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)组织中表达较高，能促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。RNA-seq和CoIP-MS实验同时检测和筛选了受CD151表达影响且与CD151相互作用的蛋白质，发现了3个蛋白——TGFβ1，CEACAM6和LGR5。pull down和免疫荧光实验确定了它们间的相互作用。基因沉默和回复实验进一步表明，CD151可能通过TGFβ1来促进CEACAM6、LGR5和Wnt通路。

使用技术：shRNA慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建

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Wu M.H. et al: MafF Is Regulated via the circ-ITCH/miR-224-5p Axis and Acts as a Tumor Suppressor in Hepatocellular Carcinoma. Oncol Res. 2020, IF=5.574.

【研究内容】：本研究发现肝癌组织和细胞中MafF（一种转录因子）的表达较低。慢病毒介导的MafF过表达抑制HCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。生物信息学分析和荧光素酶实验确定了MafF是miR-224-5p的直接靶点。RNA pull down实验表明，circ-ITCH可作为miR-224-5p海绵发挥作用。基因表达/回复实验进一步阐明，MafF的表达和抗肿瘤作用可通过circ-ITCH/miR-224-5p轴调节。本研究证实了MafF在HCC中的抑癌作用，揭示了MafF的上游调控机制，为HCC的潜在治疗靶点提供了新的视角。

使用技术：过表达慢病毒载体构建、慢病毒包装、稳转细胞株构建

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Ma H.H. et al: Pharmacological Properties of the Type 1 Tyramine Receptor in the Diamondback Moth, Plutella xylostella. Int J Mol Sci. 2019, IF=5.923.

【研究内容】：酪胺受体（TAR）可被酪胺（TA）或章鱼胺（OA）激活，并已被证明与多种昆虫的生理调节（如味觉反应、社会组织和学习行为）有关。作者在小菜蛾中新克隆得到一个酪胺受体基因Pxtar1，并在293T细胞中利用慢病毒进行了该基因的稳定表达，功能实验也显示酪胺可以激活PxTAR1受体，此外，作者还调查了Pxtar1在小菜蛾体内的表达模式。

使用技术：过表达慢病毒载体构建检测、慢病毒包装技术服务、稳转细胞株构建实验

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He S.L. et al: FAM3B promotes progression of oesophageal carcinoma via regulating the AKT–MDM2–p53 signalling axis and the epithelial‐mesenchymal transition. J Cell Mol Med. 2019, IF=5.31.

【研究内容】：本研究发现FAM3B在人食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中高表达，且与患者不良预后有相关性。慢病毒介导的FAM3B过表达抑制ESCC细胞凋亡，促进ESCC细胞迁移和侵袭。进一步研究证实，FAM3B调节AKT-MDM2-p53通路和EMT的两个核心标记物Snail和E-钙粘蛋白。这些发现提示FAM3B可能是ESCC的一个有希望的分子靶点和诊断标记物。

使用技术：慢病毒载体构建技术、慢病毒包装外包服务、稳转细胞株构建实验

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Sun H. et al: The FEN1 L209P mutation interferes with long-patch base excision repair and induces cellular transformation. Oncogene. 2016, IF=9.867

【研究内容】：FEN1是一种含特殊结构的核酸酶，对维持人基因组的稳定性中有重要作用。本研究发现了与直肠癌相关的新FEN1突变，L209P。该突变缺乏FEN1的侧翼内切酶活性、外切酶活性及缺口内切酶活性，但保留了DNA结合特性。体内和体外的基因表达实验表明，L209P突变能干扰野生型FEN1的功能，且对基因损伤更敏感，从而导致细胞内基因组的不稳定和细胞转化。

使用技术：慢病毒载体构建技术、慢病毒包装实验、稳转细胞株构建实验检测

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