当前位置:首页 > 成功案例 > 问题答疑 > 互作实验 > 免疫共沉淀Co-IP实验操作问题答疑
客户文章技术专题问题答疑
互作实验蛋白实验分子细胞实验
免疫共沉淀Co-IP实验操作问题答疑

Q1:免疫共沉淀Co-IP如果没有与目标蛋白质相互作用的蛋白质怎么办? 或者,交互蛋白的信号太弱怎么办?

A1:可能是由于以下3种原因导致:

1. 裂解缓冲液中的去污剂浓度可能过高或过强。

降低洗涤剂的浓度,或将其改为温和的。通常,洗涤剂的强度顺序应为:

SDS>Trition>NP40>Digitonin>CHAPS


2. 靶蛋白在细胞中亚定位的影响。

改变裂解缓冲液的配方,使蛋白质释放。


3. 蛋白质-蛋白质相互作用太弱或不稳定。

将抗体更改为更亲和的抗体以捕获更多的靶蛋白。或者,应用表达系统来提高目标蛋白的纯度和浓度。其他,改变样品来源或优化样品处理,使样品具有更多的目标蛋白或相互作用蛋白。


Q2:假阳性太强或检测到的非特异性结合蛋白太多该如何操作?      

A2:可能是以下2种原因:


1. 抗体浓度太高。

降低抗体浓度


2. 抗体特异性不够好。

将抗体更换为更好的抗体。如果非特异性结合仍然存在,将 NaCl 的浓度增加到低于 1M。



免疫共沉淀CoIP实验技术原理  

细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体结合到Beads上,同时诱饵蛋白的互作蛋白,也一起“共沉淀”到Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到免疫共沉淀CoIP产物。CoIP产物既可用Western Blot检测已知蛋白,也可用质谱鉴定未知蛋白。  


当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了Flag标签的诱饵蛋白,利用Flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,其互作蛋白“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后用WB或质谱检测。


辉骏生物提供的Co-IP免疫共沉淀服务分为以下两种:

1. Co-IP WB,用于检测某样本中的诱饵蛋白和待测蛋白是否存在相互作用;

2. Co-IP MS,用于筛选某样本中的诱饵蛋白与哪些蛋白具有相互作用。

Co-IP(免疫共沉淀)检测服务
服务项目
服务内容结果交付实验周期客户提供
价格
Co-IP WBWestern blot检测样本(input)中的诱饵蛋白和待测蛋白
Western blot检测图4-5周

1、实验样本

2、诱饵蛋白的IP级抗体

3、待测蛋白抗体

4、实验信息表(样本信息、抗体信息、诱饵蛋白和待测蛋白序列)


点击询价


Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白

(2组:实验组、对照组)
CoIP实验报告
Western blot检测Co-IP产物中的诱饵蛋白和待测蛋白Western blot检测图
Co-IP MS
Western blot检测样本(input)中的诱饵蛋白Western blot检测图7-8周

1、实验样本

2、诱饵蛋白的IP级抗体

3、实验信息表(样本信息、抗体信息、诱饵蛋白序列)



点击询价



Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白

(2组:实验组、对照组)
CoIP实验服务报告
Western blot检测Co-IP产物中的诱饵蛋白Western blot检测图
LC-MS/MS定性检测Co-IP产物的蛋白、筛选实验组独有蛋白(潜在互作蛋白)质谱检索表格、互作蛋白筛选表格、检测报告
针对互作蛋白做生物信息学分析(GO、KEGG pathway、String)生物信息学分析结果和报告
1周




热门推荐


蛋白组/代谢组实验
iTRAQ 定量蛋白质组学

Label Free 实验检测服务itraq,label free,lc-ms/ms质谱鉴定,DIA实验,广泛靶向代谢组学

LC-MS/MS 蛋白质谱鉴定

DIA 全息扫描定量蛋白质
❺ 广泛靶向代谢组学

蛋白/核酸相互作用实验
GST pull down

RNA pull downRNA pulldown,DNA pulldown,GST pulldown.png

DNA pull down

Co-IP 免疫共沉淀

TAP-MS串联亲和纯化

分子细胞生物学实验
基因调取/合成 (cDNA克隆)

荧光定量PCR (qPCR)分子细胞生物学实验.jpg

载体构建实验服务

miRNA靶基因验证
❺ 慢病毒包装

科研产品
❶ 哺乳动物细胞表达载体慢病毒表达载体 慢病毒干扰载体 人cdna克隆库.jpg

人cDNA克隆库

慢病毒表达载体

慢病毒干扰载体

抗体工程服务
❶ 单克隆抗体测序抗体测序 抗体从头测序 抗体表达.jpg

抗体从头测序

抗体表达服务

重组抗体表达

实验试剂盒
RNA pull down 试剂盒RNA pulldown试剂盒 GST pulldown试剂盒 coip试剂盒 flag试剂盒 .jpg

GST pull down 试剂盒

COIP 试剂盒

Flag 试剂盒




辉骏实力


电子邮箱

service@fitgene.com

联系电话

020-32053431 / 400-699-1663

联系地址

广州市黄埔区科学城广州国际企业孵化器D506

微信咨询

微信扫码一对一咨询

服务热线
4006991663
在线客服 返回顶部