小伙伴们做IP实验最常碰到的问题就是抗体轻重链污染，而最近很火的纳米抗体磁珠宣称“绝对没有轻重链污染！”，这到底是不是真的呢？

要想知道为什么没有轻重链污染，得先知道轻重链污染是怎么产生的？我们做IP时，首先在样本中加入目标蛋白抗体和proteinA/G磁珠，或者Flag磁珠等标签抗体磁珠，经过孵育、洗涤等步骤，洗脱IP复合物，接着做WB，依次加入一抗（目标蛋白抗体或Flag抗体）、二抗，最后曝光。

抗体污染产生的原因是：我们在洗脱时把IP抗体也一起洗脱下来了，在跑SDS-PAGE时，抗体四聚体变性成了重链和轻链蛋白，出现在55kD和25kD的位置上；在之后的WB实验时，二抗不仅识别了一抗，还识别了IP用的抗体，最后不仅曝光出了目标蛋白条带，还把IP抗体条带也一并显示出来了。

那纳米抗体和传统抗体有什么差别？为什么不会有轻重链污染，我们先来看一下抗体结构：

纳米抗体来源于骆驼科动物体内的重链抗体（HCAb），只有一个重链可变区，结构很简单，没有传统抗体55kD和25kD的重链和轻链结构，分子量仅为传统抗体的1/10。

虽然商品化的传统抗体磁珠已经将抗体偶联在了磁珠上，但拥有四条链结构的传统抗体掉落的风险要更大，而事实也证明只要煮磁珠洗脱，抗体必然掉落。相反，纳米抗体因结构简单而与磁珠结合更紧密，难以掉落产生污染，并且分子量小，对IP结果的影响很小。

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