01 纳米抗体磁珠简介 

纳米抗体（Nanobody，Nb）是一类源自骆驼科动物（如骆驼、羊驼）的单域抗体片段，核心特征是仅由重链可变区（VHH）构成，无轻链结构。关键特点包括：

（1）分子量极小：仅15 kDa，约为传统抗体的1/10；

（2）特异性强：抗原结合位点与传统抗体相当，能精准识别目标分子（如蛋白、抗原表位）；

（3）稳定性高：耐酸碱、耐高温、抗蛋白酶降解，在复杂环境（如生物样本、工业反应体系）中仍能保持活性；

（4）易生产与改造：可通过基因工程在细胞中大量表达。

磁珠是一种具有超顺磁性的微小球体，由磁性内核（通常为铁的衍生物）、生物相容性外壳以及表面偶联的各种功能配体组成。这种独特结构使磁珠在外加磁场作用下表现出弱磁性，便于快速吸附分离，而撤去磁场后自身就不再带有磁性，可轻松重悬分散。

将纳米抗体（分子量小、特异性强）偶联到磁性微球表面形成的复合物，主要用于靶向捕获、分离生物样本中的特定分子（如蛋白、抗原）。

（1）免疫沉淀 (IP)：免疫共沉淀（CoIP）、RNA结合蛋白免疫共沉淀（RIP）、染色质免疫共沉淀（ChIP），捕获样本中与目标蛋白相互作用的蛋白或核酸复合物，研究大分子间的相互作用；
（2）蛋白纯化：从复杂样本中特异性捕获目标蛋白（如酶、抗原、重组蛋白）；
（3）外泌体分离：靶向结合外泌体表面标志物 (CD63、CD81等)，从复杂样本中捕获外泌体；
（4）细胞分离：靶向结合某些细胞表面的特异性标志物 (如CD分子、肿瘤抗原)，分离标记的细胞。

（1）纳米抗体分子量小、且常用种属（小鼠、兔、大鼠、羊等）的二抗无法识别，因此纳米抗体磁珠可以完全避免IP时的抗体轻重链污染问题；

（2）纳米抗体与磁珠的结合效率更高，亲和力和特异性更强；

（3）稳定性好（耐酸碱/高温），分别在4℃和40℃的情况下保存7天后进行检测，IP效果不会受明显的影响。

相比传统抗体磁珠更少，但仍可能存在。减少方法：①优化洗涤液的离子强度（如调整NaCl浓度）；②控制孵育时间和温度（避免过度结合）；③减少蛋白的量或降低蛋白浓度。

低速离心不会损坏，但高速可能导致磁珠聚团。建议转速≤800 g，离心时间1-2 min，仅在需要快速收集磁珠时使用（优先推荐用磁性分离架，避免离心对磁珠的潜在影响）。

低浓度EDTA（如≤5 mM）通常无影响，若浓度过高（如＞10 mM），可能会影响磁珠稳定性或纳米抗体与抗原的结合效率，建议提前用透析或稀释方式降低EDTA浓度。

Q4 实验中发现磁珠出现聚团，是什么原因？该怎么处理？

常见原因包括冷冻、干燥、结合蛋白过量或缓冲液离子强度异常。  处理方法：①若未完全聚团，可加入少量缓冲液，轻轻吹打至分散；②减少蛋白加入量或进行适量稀释；③若聚团严重，建议更换新的磁珠，避免影响结合效率。

Q5 延长磁珠与样本的孵育时间，会提高结合效率吗？

延长时间可能会提高结合效率，但是也有可能增加非特异性吸附。  若样本中目标蛋白丰度极低，可延长到4 h至过夜，但需同时增加洗涤次数，减少杂蛋白吸附；延长至4小时以上时，需预实验验证结合效率与非特异性吸附的平衡。

  04 磁珠储存  

辉骏生物生产的纳米抗体磁珠在出厂前均做过稳定性测试，37℃烘箱中放置7天，不影响磁珠效果，所以物流或短期室温放置不影响使用，常规保存需放置4℃冰箱，但应避免冷冻。

低浓度EDTA（如≤5 mM）通常无影响，若浓度过高（如＞10 mM），可能会影响磁珠稳定性或纳米抗体与抗原的结合效率，建议提前用透析或稀释方式降低EDTA浓度。

Q4 实验中发现磁珠出现聚团，是什么原因？该怎么处理？

正常储存和使用下，脱落率极低（因为其为共价键偶联结合）。验证方法：①取少量磁珠溶液离心，检测上清中是否有游离抗体（如用ELISA、SDS-PAGE）；②多次洗涤后，测试磁珠的结合效率是否下降。

  05 纳米抗体偶联磁珠  

如果您在使用纳米抗体磁珠上还有疑问，欢迎咨询我们的技术人员。辉骏生物还提供各种类型蛋白互作试剂盒以及互作实验服务（RIP、RNA pull down、ChIP、DNA pull down、IP实验），可根据实验需求定进行选择，助力您的科研更高效、更精准！