蛋白标签是指利用DNA重组技术,在目标蛋白质的N端或C端附加上的特定氨基酸序列(短肽或蛋白)。它不仅能辅助目标蛋白的表达、纯化和定位检测,更能作为“关键工具”助力互作蛋白的捕获与验证,是开展Pull-down、Co-IP等互作实验的基础。
表位标签、亲和标签和荧光标签是三类最常用的蛋白标签。其中,亲和标签常用于蛋白pull-down实验—通过亲和层析技术,将带标签的“诱饵蛋白”固定在能与标签特异性结合的亲和介质上,再与含潜在“猎物蛋白”的样品(如细胞裂解液)孵育,通过洗脱和检测(Western-blot或质谱),确定与诱饵蛋白结合的“猎物蛋白”。
还在被互作实验用的各种蛋白标签搞得头大?它们在互作实验里到底有啥用、有什么区别?今天一次性捋清楚,让你看完不再懵圈。
辉骏生物在本文主要给大家介绍pull-down实验中最常见的4种亲和标签,分别为:His、GST、Strep、MBP。
总体来说:
His 标签——“性价比之王”,适合多数常规场景,如常见的His pull down;
GST标签——“提高可溶性”,最适合蛋白相互作用分析,如GST pull down;
Strep-Tag II 标签——“高纯度、敏感蛋白首选”,适合严苛实验需求;
MBP标签——“难溶蛋白的救星”。
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