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Pull down实验提速50%的秘诀:4类蛋白标签选择指南!

蛋白标签是指利用DNA重组技术,在目标蛋白质的N端或C端附加上的特定氨基酸序列(短肽或蛋白)。它不仅能辅助目标蛋白的表达、纯化和定位检测,更能作为“关键工具”助力互作蛋白的捕获与验证,是开展Pull-downCo-IP等互作实验的基础。

表位标签、亲和标签和荧光标签是三类最常用的蛋白标签。其中,亲和标签常用于蛋白pull-down实验—通过亲和层析技术,将带标签的“诱饵蛋白”固定在能与标签特异性结合的亲和介质上,再与含潜在“猎物蛋白”的样品(如细胞裂解液)孵育,通过洗脱和检测(Western-blot质谱),确定与诱饵蛋白结合的“猎物蛋白”。

还在被互作实验用的各种蛋白标签搞得头大?它们在互作实验里到底有啥用、有什么区别?今天一次性捋清楚,让你看完不再懵圈。

辉骏生物在本文主要给大家介绍pull-down实验中最常见的4种亲和标签,分别为:His、GST、Strep、MBP

1 His标签

His标签通常由6-10个连续组氨酸组成,His标签能与二价金属离子(如Ni²⁺或Co²⁺)形成配位键,从而与螯合的树脂特异性结合,达到蛋白亲和纯化的目的。

通过咪唑来洗脱,蛋白纯度一般,标签也几乎没有促溶性,但是适用于原核、酵母、哺乳动物、昆虫各类表达系统,并且成本非常低。

适用实验场景:标签小,干扰少,最通用,适合大多数可溶性蛋白。


2 GST标签

GST标签来源于血吸虫的谷胱甘肽S-转移酶,分子量约26 kDa,利用GST与谷胱甘肽(一种含巯基的三肽,GSH)的高亲和性进行蛋白纯化。

通过还原型谷胱甘肽进行洗脱,蛋白纯度较高,但有一定的促溶性,适合难溶蛋白,它通常用于原核或酵母系统,并且成本相对高一些。

适用实验场景:适合研究蛋白-蛋白相互作用(GST pull-down);GST标签可增强部分蛋白可溶性,助力难溶诱饵蛋白的实验。


3 Strep-tag II标签

Strep-tag II标签由8个氨基酸WSHPQFEK)组成的小标签,与Strep-Tactin蛋白高度特异结合。

通过生物素进行温和洗脱,单次纯化的蛋白纯度能达到90%以上,适用原核酵母哺乳动物昆虫各类表达系统,但成本很高。

适用实验场景:洗脱最温和,不影响蛋白活性,适合后续需保持蛋白功能的实验。


4 MBP标签

MBP标签是一种来源于大肠杆菌的天然蛋白,396个氨基酸残基,分子量约为40 kDa。标签结构中包含一个稳定的β-折叠和α-螺旋结构域,形成一个深槽,可与麦芽糖或直链淀粉结合,从而实现目标蛋白的标记和分离。

通过麦芽糖进行洗脱,蛋白纯度高,也有很强的促溶性尤其对于在原核表达系统中易形成包涵体的蛋白,MBP标签往往能提高其可溶表达比例,因而在特定情况下具有较强的实用价值。

适用实验场景:适合难溶性诱饵蛋白(MBP能显著提升蛋白溶解度);但标签较大,需谨慎选择。

辉骏生物4种亲和标签对比,分别为:His、GST、Strep、MBP,专业提供各类型标签蛋白试剂盒.png

总体来说:

His 标签——“性价比之王”,适合多数常规场景,如常见的His pull down;

GST标签——“提高可溶性,最适合蛋白相互作用分析GST pull down

Strep-Tag II 标签——“高纯度、敏感蛋白首选”,适合严苛实验需求;

MBP标签——“难溶蛋白的救星”。


pull-down实验产品试剂盒


 实验类型
 产品名称
 货号
 RNA pull down
 F2-RNA pull-down试剂盒
 FI8701
 生物素RNA pull-down试剂盒
 FI8702
 CircRNA pull-down试剂盒
 FI8710
 DNA pull down
 DNA pull-down试剂盒
 FI8901
 蛋白 pull down
 GST pull-down试剂盒
 FI8804
 His pull-down试剂盒
 FI8805
 药物 pull down
 生物素药物pull-down试剂盒
 FI8601


如果你在蛋白标签的选择、表达策略或纯化流程上还有疑问,欢迎咨询我们:4006991663。

辉骏生物提供各种类型蛋白互作试剂盒以及互作实验服务RIPRNA pull downChIPDNA pull down、IP实验),可根据实验需求定进行选择,助力您的科研更高效、更精准!

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