在最近发表在《Nature》杂志上的一项研究中，研究人员调查了具有相似重链的幼稚、未转换、记忆和成浆细胞表型的不相关B细胞对是否也具有相同的轻链。

背景

尽管如此，将抗体按功能分组仍是一个挑战。理论上，具有相同功能的抗体应该具有相似的表位和互补的表位。然而，虽然在试管内特异性抗体的分析抗原结合相对来说更简单，只有少量的抗体可以分析它们的中和活性。

克隆型是来自单个供体的抗体组，其来源于共同的祖先重组细胞。在个体内部和个体之间发现了具有相同功能的相似克隆型。

涉及流感、寨卡和人类免疫缺陷病毒(HIV)的研究表明，抗体在其重链和轻链基因中表现出一定的保真度。然而，轻链一致性，即不属于具有相似重链的相同克隆型的不相关B细胞中相似轻链的出现，还没有被检验。

关于研究

在目前的研究中，研究人员对160万对原始、非转换、浆母细胞和类别转换记忆表型的B细胞进行了全长抗体基因测序，这些B细胞是从四个无关个体捐献的外周血样本中获得的。序列覆盖了V基因的前导区和用于确定抗体亚类和同种型的部分恒定区。

根据从每个供体推断的V基因等位基因估计的连接区外发生的体细胞超突变，将序列分为初始和记忆B细胞组。不显示突变的抗体序列被认为是原始的，其他的被认为是记忆B细胞序列。使用流式细胞仪分类来确认这些分配。

分别比较具有相似重链V基因和抗体重链第三互补决定区(CDRH3)长度的B细胞对的原始和记忆细胞类型，以确定轻链基因是否也相似。

假设抗体复发是由常见的重组事件引起的，通过将抗体序列与V(D)J参考序列进行比对来分析连接序列。这使得研究人员能够确定观察到的复发率是否与偶然预期的复发率相当。

模拟也用于预测复发的初始抗体的数量。还将复发抗体与任意抗体进行比较，以确定连接区域的复杂性。

研究结果

结果表明，在V区具有相同重链基因和100% cdr H2氨基酸同一性的不同来源记忆B细胞中，轻链一致性为82%。相比之下，未经功能性选择且不含体细胞超突变的幼稚B细胞，其轻链只有10%的一致性。

因此，在记忆B细胞中，轻链相干可能与重链相干同时发生。这些细胞由外周和胸腺选择形成，并产生功能性抗体。

对冠状病毒疾病2019(新冠肺炎)、多发性硬化、川崎病和其他疾病相关的独立数据集的分析表明，记忆B细胞中的轻链一致性为93%。然而，本数据与其他独立的更早和更近的数据的成对比较揭示了70%的轻链一致性，因此排除了这些结果被交叉污染解释的可能性。

此外，10%的记忆和幼稚B细胞的随机交换导致记忆B细胞82%的轻链一致性和幼稚细胞17%的一致性，从而排除了可能的细胞错误分类。

连接区的比较显示，与任意抗体相比，记忆和初始B细胞类型的复发性抗体具有明显更少的插入碱基和相对不复杂的连接区。这增加了偶然事件再次发生的可能性。

与初始抗体相比，具有插入核苷酸的复发性抗体继续表现出轻链一致性。这表明所有功能性抗体，无论其复杂性如何，都表现出轻链一致性，只是频率不同。

结论

总的来说，目前的研究报告说，轻链一致性在记忆B细胞中普遍存在，而在幼稚细胞中的复发纯粹是一个机会的函数。

轻链相干性与选择和获得的功能相关。这一观察解释了为什么它在幼稚B细胞中不太常见，而在抗原暴露后经历中枢和外周选择的记忆B细胞中更普遍。此外，与任意抗体连接区相比，初始和记忆B细胞的复发与复发抗体中连接复杂性的降低有关，因此解释了它们的复发率。

蛋白组/代谢组实验

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蛋白/核酸相互作用实验

❶ GST pull down

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❺ TAP-MS串联亲和纯化

分子细胞生物学实验

❶ 基因调取/合成 (cDNA克隆)

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❸ 载体构建实验服务

❹ miRNA靶基因验证
❺ 慢病毒包装

科研产品

❶ 哺乳动物细胞表达载体

❷ 人cDNA克隆库

❸ 慢病毒表达载体

❹ 慢病毒干扰载体

抗体工程服务

❶ 单克隆抗体测序

❷ 抗体从头测序

❸ 抗体表达服务

❹ 重组抗体表达

实验试剂盒

❶ RNA pull down 试剂盒

❷ GST pull down 试剂盒

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