iTRAQ 定量蛋白质分析的基本原理是在末端氨基和赖氨酸侧将具有共价键的标记肽与 iTRAQ 试剂结合，通过高效液相色谱、初级质谱和二级质谱分离后，可以对样品中的蛋白质进行表征和相对定量。

iTRAQ 分析适用于广泛的样品来源，几乎所有收集的样品都可以在蛋白质组学研究中使用该技术进行筛选。  无论是寻找功能性蛋白质、机理探索，还是筛选疾病生物标志物，iTRAQ 定量蛋白质组学都能以最便捷的方式将样本转化为研究结果。

理论上，iTRAQ 分析 需要每个样品至少 300 μg 的蛋白质才能达到通常低于 100% 的成功实验率。 因此，理想情况下，每次实验准备的蛋白质量应足以进行两次独立实验。 此外，收集的样本可能并不总是满足调查的需要。 因此，需要对选定的样本以及如何充分处理它们给予更多的思考。

样本种类繁多，包括组织、细胞、血液（血清或血浆）、脑脊液、尿液、骨骼、关节滑液等，不同样本的采集方法也不同。  一般来说，需要满足以下几点：

1.代表性样品 ：

样品的代表性直接关系到检测结果的科学意义； 因此，需要根据实验目的仔细选择抽样方案。 实验样品和对照之间不应有污染。 如果可用，来自实验组和对照组的样品应在采样时间、地点和处理条件方面保持一致。 否则，可能会影响实验结果的整体可信度。 体液样本需要通过逐步离心（或膜）去除干扰因素，包括但不限于细胞、细胞碎片和细菌。 不同样本来源的蛋白质组是多种多样的，甚至同一组织样本的不同细胞也可以有显着差异； 因此，量化两个可能不相关的样本是不可比的。 因此，在设计实验以制备样品时，考虑生物实验中的单变量原理非常重要。

2.样品准确性 ：

必须准确记录各种代表性样品的数据。 所有样品必须按要求（低温和即时）收集、制备、储存和运输，从而根据实验设计获得最终数据。

3.样品时效性 ：

样品质量是影响各类测试实验中实验结果的关键因素。 用于研究的样品应立即收集、制备、储存和运输，以尽量减少实验的样品收集时间。 应特别注意易降解的样本，例如胰腺； 以及易受微生物污染的样品，例如尿液。

4.低温处理 ：

样品采集、标记、记录后，立即用液氮速冻，-80℃保存。 不要太相信 -80°C 冰箱。 一般建议蛋白质组学研究的样品保存时间不要超过一年，长期保存的样品在使用前需要进行定性检查以确定稳定性。

辉骏生物建议您在取样时同时保留和备份样品，以防止部分降解和延迟重新取样。  即使所有样品都合格，备份样品也可以用于实验的不同方面（例如，定量验证、蛋白质方面、生化方面等）。

iTRAQ定量蛋白质组学技术实验*辉骏服务优势

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iTRAQ技术实验 客户文献

1. Li K. et al: Tyrosine kinase Fyn promotes osteoarthritis by activating the β-catenin pathway. Ann Rheum Dis. 2018，IF=14.299. 【研究内容】：骨关节炎和软骨退变过程中，WNT/β-catenin被激活的机制尚未完全明确，本研究利用iTRAQ蛋白质组学技术，筛选了年轻（2月龄）和老龄（12月龄）小鼠的蛋白表达差异，并发现一种在老年软骨中强烈上调的蛋白——酪氨酸激酶Fyn。为了探究Fyn促进骨关节炎发展的机制，客户将免疫沉淀（IP）与蛋白质组学分析相结合，最终证明酪氨酸激酶Fyn可以通过激活β-catenin通路促进关节炎，为骨关节炎提供了一个新的治疗靶点。 使用技术：iTRAQ蛋白质组学分析、iTraq实验外包服务

2. Wu X.S. et al: Ubiquitin-specific protease 3 promotes cell migration and invasion by interacting with and deubiquitinating SUZ12 in gastric cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2019，IF= 7.068. 【研究内容】：泛素特异性蛋白酶3 (USP3) 的异常表达可能在肿瘤发展中起重要作用，然而其促进胃癌转移的机制尚不明确。本研究利用itraq蛋白质组学技术鉴定了USP3过表达胃癌细胞与对照细胞之间差异表达的蛋白质，发现SUZ12对于USP3介导的胃癌活性是不可或缺的，USP3结合SUZ12，去泛素化SUZ12并使其稳定。SUZ12敲除抑制USP3诱导的迁移、侵袭和EMT。结果表明USP3-SUZ12信号通路促进胃癌发展。   使用技术：itraq定量实验、itraq定量蛋白组学检测

4. Zeng L. et al: Asparagine Synthetase and Filamin A Have Different Roles in Ovarian Cancer. Front Oncol. 2019，IF=4.848. 【研究内容】：临床上早期卵巢浆液性癌较难发现，而高级别浆液性癌(HGSC)和低级别浆液性癌(LGSC)的蛋白表达谱将为诊断和化疗提供重要信息。研究者通过iTRAQ技术对13例HGSC和7例LGSC患者的标本进行了蛋白质组学分析，共鉴定出323个差异表达的蛋白质。IHC验证后，选择天冬酰胺合成酶(ASNS)和细丝蛋白A(FLNA)进行进一步的功能研究。体内和体外实验结果表明，ASNS和FLNA是HGSC和LGSC的不同的生物标志物，可能对浆液性癌的预后和临床治疗有潜在的价值。 使用技术：itraq分析、itraq差异蛋白实验

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