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【实用】免疫共沉淀Co-IP实验:1分钟解锁IP-MS送样全流程

 做Co-IP MS实验的你,是否总被两大难题困住?目标蛋白洗脱回收率惨淡,辛苦做的样本还没上质谱就被污染,实验反复翻车、耗时耗力?

其实核心关键就藏在「洗脱后到送样」的全流程里!不用再查繁杂文献、不用向师兄师姐反复请教,辉骏生物直接上视频实操,1分钟手把手教会你Co-IP送质谱检测全流程——从洗脱操作到样本运输,每一步都清晰呈现,新手也能跟着镜头一步步做,精准避开所有实验坑,让你的实验一次成功!


 


关键操作要点‌:

1. ‌洗脱后处理‌:磁吸分离要快,上清液及时收集,减少蛋白二次吸附或降解。

‌2. 全程低温保护‌:样品4℃操作,加蛋白酶抑制剂,防降解。

3‌. 送样前确认‌:检查样本体积、浓度,标记清晰(名称、浓度、处理方式),密封后低温运输。

‌4. 避免污染‌:洗脱液别含高浓度去污剂、强还原剂等质谱禁忌成分。



辉骏生物提供的Co-IP免疫共沉淀服务分为以下两种:


1. Co-IP WB,用于检测某样本中的诱饵蛋白和待测蛋白是否存在相互作用;

2. Co-IP MS,用于筛选某样本中的诱饵蛋白与哪些蛋白具有相互作用。


Co-IP(免疫共沉淀)检测服务
服务项目
服务内容结果交付实验周期客户提供
价格
Co-IP WBWestern blot检测样本(input)中的诱饵蛋白和待测蛋白
Western blot检测图3-4周

1、实验样本

2、诱饵蛋白的IP级抗体

3、待测蛋白抗体

4、实验信息表(样本信息、抗体信息、诱饵蛋白和待测蛋白序列)


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Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白

(2组:实验组、对照组)
CoIP实验报告
Western blot检测Co-IP产物中的诱饵蛋白和待测蛋白Western blot检测图
Co-IP MS
Western blot检测样本(input)中的诱饵蛋白Western blot检测图5-6周

1、实验样本

2、诱饵蛋白的IP级抗体

3、实验信息表(样本信息、抗体信息、诱饵蛋白序列)



点击询价



Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白

(2组:实验组、对照组)
CoIP实验服务报告
Western blot检测Co-IP产物中的诱饵蛋白Western blot检测图
LC-MS/MS定性检测Co-IP产物的蛋白、筛选实验组独有蛋白(潜在互作蛋白)质谱检索表格、互作蛋白筛选表格、检测报告
针对互作蛋白做生物信息学分析(GO、KEGG pathway、String)生物信息学分析结果和报告
1周


加技术专员微信了解Co-IP实验服务排期、优惠等
18927549347、13430303037




CoIP实验技术服务样本要求


1. 送样量要求


样本类型
Co-IP WB 建议送样量Co-IP MS 建议送样量
动物细胞3*10e7个细胞/组(约3个10cm皿)5*10e7个细胞/组(约5个10cm皿)
动物组织1g/组2g/组
植物叶片2g/组4g/组
植物根或果实4g/组8g/组
菌体50ul菌体沉淀/组100ul菌体沉淀/组


▲注意:表列出的均为每组样本的送样量,如果实验和对照组用的样本一致,此样本量*2。详细送样指南联系辉骏生物客服或销售索取




免疫共沉淀CoIP实验服务—辉骏生物客户文章


1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019,IF=17.352.
【研究内容】:客户发现,作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因,受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合,免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明,FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力,参与了脱落酸信号通路。
使用相关技术:质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS实验


2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019,IF= 13.312.
【研究内容】:客户利用蛋白质组学技术,筛选出胆固醇致前列腺癌发生上皮间质转变(EMT)的重要基因APMAP和EGFR。通过在前列腺癌细胞表达3*Flag-APMAP基因,并利用免疫共沉淀CoIP及质谱鉴定技术,客户发现EPS15R可与APMAP结合。进一步的研究证实,体内EPS15R-APMAP复合物通过EGFR致使细胞发生EMT。
使用相关技术:蛋白质组学、质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP


3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067.
【研究内容】:前期研究表明UBAP2L蛋白参与应激颗粒形成。客户在这项研究中,用免疫共沉淀结合质谱等技术,发现PRMT1甲基化UBAP2L,UBAP2L蛋白并且和另外三个应激颗粒形成有关的重要蛋白有相互作用。这些蛋白复合物介导了应激颗粒的形成。
使用相关技术:CoIP技术服务、质谱鉴定、修饰位点鉴定


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