免疫共沉淀（Co-IP）技术简介 Co-IP（免疫共沉淀）是生物医学与基础研究中常用的蛋白质分析技术，基于抗原 - 抗体免疫结合原理，可富集体内目标蛋白及其互作复合体。 

根据目标蛋白是否带标签，Co-IP分为两类： 1.  内源性蛋白Co-IP：需使用IP级别抗体。 2.  标签蛋白Co-IP：适用于目的蛋白缺乏优质IP抗体或细胞内本底表达量低的场景，需构建过表达质粒并转染至细胞。

Co-IP核心应用 

1.  验证已知蛋白-蛋白互作：免疫沉淀靶蛋白，确认其与已知结合蛋白的相互作用关系。 

2.  分析蛋白质复合物：结合质谱技术鉴定复合物组分及翻译后修饰（PTM），解析复合物构成与PTM功能。 

3.  探究PTM对蛋白互作的调控：针对甲基化、磷酸化等修饰的靶蛋白，分析修饰状态对互作的影响及调控机制。

4.  助力药物靶点筛选与疗效评估：筛选疾病通路中潜在药物靶点；检测候选药物对蛋白复合物互作的影响，评估药物疗效。

Co-IP实验操作流程 

1.  蛋白提取：裂解组织/细胞，获取目标蛋白 

2.  Input制备：取裂解液制样，验证目标蛋白表达 

3.  免疫共沉淀：抗体磁珠捕获目标蛋白，形成复合物 

4.  洗涤：磁力架辅助，漂洗液去除未结合蛋白 

5.  煮脱：热处理分离磁珠-蛋白抗体复合物 

6.  蛋白检测：通过WB或质谱分析验证结果 

PS：辉骏生物自有质谱平台，专业开展IP、pull-down产物微量蛋白鉴定及生信分析。

Co-IP解读Nature案例1

免疫共沉淀结果表明，在人源高分化肝癌细胞系中观察到了PRMT1与FBXO7之间的相互作用。这一新发现揭示了一种可能存在的全新细胞信号传导途径，为深入探究细胞内互动关系提供了重要线索。

图2 引自FBXO7 ubiquitinates PRMT1 to suppress serine synthesis and tumor growth in hepatocellular carcinoma. Nat Commun 15(1):4790(2024). 

Co-IP解读Nature案例2

Co-IP解读Nature案例3

通过在293T细胞中转染Flag-AATF全长质粒和不同截短体（检测蛋白结合结构域），发现Flag-AATF全长与XRCC4存在相互作用，进一步验证Flag-AATF的哪一部分与XRCC4发生互作，就构建了截短体，发现缺失331-380氨基酸片段时，XRCC4条带消失，表明Flag-AATF的331-380为XRCC4互作靶点。这一关键结构域的明确，不仅为解析 AATF 与 XRCC4 互作的分子基础提供了核心依据，更有助于深入探究二者协同参与的细胞生理或病理进程，为后续相关机制研究和靶向策略开发奠定了重要基础。

IP 实验的一大痛点，就是抗体磁珠孵育洗脱后，WB 结果常出现抗体轻重链杂带，既掩盖目的条带、干扰结果解读，甚至导致实验失败。

辉骏生物标签纳米抗体磁珠堪称 “救星神器”：搭载羊驼源纳米抗体，仅 15kD 单链结构，无传统抗体轻重链，从根源杜绝杂带污染，让 WB 条带干净清晰。同时它亲和力优异、用量少、成本低，助力 IP 实验高效完成。

图 5 纳米抗体磁珠无抗体轻重链的 IP 结果示意图

Flag、HA、V5、GFP 等多种标签的纳米抗体磁珠，以及配套 IP 试剂盒，辉骏生物均有供应，迎随时联系！

PS:辉骏生物标签纳米抗体磁珠结合量高，亲和力强，无轻重链污染。

辉骏生物Co-IP客户文章

客户结果呈现：WB结果表明，使用辉骏生物的磁珠在样品中获得了单一清晰的靶蛋白条带，且富集效率高，具备卓越的特异性 （Flag-GPX4与HA-OTUB1免疫共沉淀结果）

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